臨床微生物検査は、感染症の予防または治療を行う上で大変重要な検査です。人体から採取される様々なもの(喀痰、糞便、膿、血液、髄液・・・)や、場合によっては食物や環境なども検査対象として病原微生物の存在を調べます。
 まず、微生物検査の基本となるグラム染色からふれていきたいと思います。

 

 

 

 

 細菌を染色することにより細胞壁の構造の違いから、グラム陽性(青)グラム陰性(赤)に染め分けることが出来ます。そして、形態が球状なのか桿状かによって検査を進める指針が決まってきます。
 また、培養して得られたコロニーを染めることも大切ですが、提出された検体を染めて、菌体を確認するのはもちろん、それ以外の様々な情報を読みとり付加価値として臨床へ届けることがとても大切です。

 

グラム染色に必要な情報

 

 

患者情報(既往歴、薬剤、血液データなど)

検査目的(目的菌、監視など)

検体採取に関する情報(時間、採取手技など)

検体の肉眼的情報、顕微鏡的情報

 

 付加価値のあるグラム染色所見とは・・・

 細菌検査は、検体提出をしてから菌名や薬剤感受性の結果を出すためには、通常2日以上の時間を要します。これだけの時間を費やすと、結果が出た頃には患者が快方に向かっていたりする場合もあり、後から確認するだけの検査となってしまいます。しかし、検査室に届けられた検体をグラム染色する事により、起炎菌を推定できる場合があり、菌名を推定出来なくても本来無菌的な検体であれば菌の存在が治療を行ううえでの大きな情報となります。また、好中球による貪食像や様々な細胞や物質を見分ける事で病態に迫る情報を得る事が出来ます。
 このように細菌検査の基本中の基本であるグラム染色からは、培養結果や薬剤感受性検査以上に付加価値のある情報を速やかに得ることができます。

 


 

 


肺炎を疑う患者の喀痰が提出された場合

検体提出後に速やかに染色を実施。患者情報をしっかりと把握して鏡検する。

「莢膜を持つランセット状の肺炎球菌を強く疑う菌を多数認めます。また、貪食像は認められないものの多数の好中球を認めるため肺炎球菌による肺炎を強く疑います。」

というようなコメントを検体提出後30分以内に返す事が出来る。

適切な抗菌薬投与、早期治癒のために役立つ。

 

 

肺炎球菌による肺炎(喀痰:フェイバー法)
莢膜を持つため貪食には抵抗性がある

 

 


 

 

 


長期入院で肺炎を疑う患者の喀痰が提出された場合

患者情報をしっかりと把握し、抗生剤の投与状況、感染マーカーの上昇、過去のMRSAの保菌から
「クラスター状のグラム陽性球菌を多数認め、また、それらの貪食像を多数認めます。過去の保菌状況からMRSAによる肺炎を疑います。」

というようなコメントを検体提出後30分以内に返す事が出来る。

適切な抗菌薬投与、早期治癒のために役立つ。

 

 

MRSAによる肺炎(喀痰:フェイバー法)
好中球に貪食されている

 


 

 

 


長期入院で肺炎を疑う患者の喀痰が提出された場合


培養では、上記道系の常在菌群のみしか検出しないが、しっかりと鏡検することで、常在菌群による誤嚥性肺炎と判断出来る。

 

 

誤嚥性肺炎(喀痰:フェイバー法)
上記道の常在菌群が好中球に貪食されている
その他の部分では扁平上皮も好中球に取り囲ま
れている様子も多数観察された。      

 

 


 

 

染色にも工夫を

 

 

 

 

 

 グラム染色も万能ではなく、様々な条件により見づらい標本になってしまう場合があります。そんな場合はちょっとした工夫で解決できます。

 

例1 白血球の内部が観察出来ない

 

 

 

 

白血球の中まで観察する事が出来ない標本
(フェイバー法)

 

左と同じ検体をメチレンブルーによる単染色を実施した標本。MRSAの貪食像がはっきりと認められる。

 

 


 

例2 膿汁を染色したが、細胞成分が多く観察しづらい

 

 

 

 

 

膿性の強い検体をそのまま染色しても右の写真のように観察しづらいものになることが多く、薄く塗抹したつもりでもうまくいかない場合があります。

 

 

 

 

滅菌生理食塩水を1白金時づつスライドガラス状に必要数載せて、検体を倍々希釈する。上記の標本のように濃度勾配のある標本が出来上がる。

 

 

 

 

見づらかった標本であったが、希釈された部分を観察するとはっきりとグラム陰性桿菌が認められる。

 


 

 喀痰に関して数例紹介しましたが、様々な検体から有意な情報を得ることが出来ます。
迅速化に関しても大変優れ、コストも安く、どこの検査室でも実施可能です。